抗体亲和纯化系列
——抗体纯化，若有选择，必是首选
产品概述
Protein A、Protein G是最常应用于抗体亲和纯化和免疫沉淀的蛋白。将Protein A、G分别固定在不同的介质上，或同时将Protein A、G共价偶联到介质表面，是从腹水、细胞培养物上清和血清中分离IgG和IgG亚家族的有效工具。
Protein L源于细菌，能更广泛地结合各种类型以及亚类的免疫球蛋白，包括所有类型的IgG和单链可变区(ScFv)以及Fab片段。该蛋白只与抗体的kappa链结合而不会影响抗体的抗原结合位点，这一特性使其与蛋白A或蛋白G相比，能更广泛地结合各种来源及亚类的抗体。
Yeasen生物提供一系列以蛋白A、蛋白G与蛋白L为核心的抗体纯化工具，涵盖不同类型填料树脂及自动层析预装柱，方便使用手动或自动化方式纯化抗体蛋白质。
Protein A、G、L的差异分析
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Protein A |
Protein G |
Protein A/G |
Protein L |
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优点 |
高流量； 结合能力强； 与IgG的Fc和Fab和F（ab’）2片段结合 |
比Protein A有结合范围更广泛 |
结合范围更广； 结合能力更强； 实用性更高 |
不仅可以结合所有的Ig类(IgG，IgM，IgA，IgE和IgD)； 还可以结合单个轻链（Scfv）和Fab片段 |
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缺点 |
宿主细胞蛋白的一些非特异性结合 |
不能像蛋白A一样耐受苛刻的洗脱条件 |
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不结合牛、山羊或绵羊来源的免疫球蛋白 |
附表1是关于蛋白A和蛋白G对于不同的免疫球蛋白相对结合力的比较，可用于预测蛋白A或蛋白G作为亲和介质时的选用指导。对于来自特别物种IgG的最佳结合条件，应该查阅近期的文献，获得最有价值的信息。
纯化原理
亲和纯化是一种具有可逆反应的生化分离纯化技术，如抗原与抗体。适用于从成分复杂且杂质含量远大于目标物的混合物中提纯目标物。如图1所示，首先填料与介质偶联，结合形成具有特异亲和性的分离介质，再向柱子中注入样本，配体选择性的吸附目标物质，平衡液洗杂，最终用洗脱液将目标物质进行洗脱。
图1 亲和层析示意图
产品性能
将蛋白样本Protein A和Protein G纯化IgG，IgG片段和亚类的基础是二者对IgG-类型的多克隆抗体和单克隆抗体具有很高的特异性亲和力。
图2 Protein A、G亲和性
纯化指南
Yeasen生物抗体纯化类工具，以基因改造后的Protein A/G、Protein L为原料，通过不同化学方法将其定向、高效的偶联到琼脂糖基质上，不仅降低了蛋白的非特异性结合、实现了树脂较高的抗体载量，同时也获得了适用于不同纯化要求的抗体纯化产品。
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产品系列 |
普通型纯化树脂系列 |
快速型纯化树脂系列 |
预装柱系列 |
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Protein A、G 、A/G、L Agarose |
Protein A、G 、A/G、L 4FF Agarose |
Protein A、G、L 4FF Chromatography Column |
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平均粒径d50V |
45-165µm |
90µm |
90µm |
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配基 |
重组蛋白 |
重组耐碱蛋白 |
重组耐碱蛋白 |
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载量 |
Protein A > 40mg人IgG/mL Protein G > 30mg人IgG/mL Protein A/G > 20mg人IgG/mL Protein L > 15mg人IgG/mL |
Protein A > 40mg人IgG/mL Protein G > 30mg人IgG/mL Protein A/G > 20mg人IgG/Ml Protein L > 15mg人IgG/mL |
Protein A > 40mg人IgG/mL Protein G > 30mg人IgG/mL Protein A/G > 20mg人IgG/mL Protein L > 30mg人IgG/mL |
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最大操作压力 |
0.1MPa,1bar |
0.3MPa,3bar |
0.3MPa,3bar |
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支撑物 |
4%琼脂糖微球 |
高度交联4%琼脂糖微球 |
高度交联4%琼脂糖微球 |
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优势 |
非特异性结合低，高载量 |
非特异性结合极低，高载量高流速，强稳定性 |
柱效稳定，高载量，高流速，强稳定性，标准接口适配商品化各类中压色谱系统 |
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推荐应用 |
任意规模抗体纯化 |
任意规模抗体纯化，IP |
小规模抗体纯化 |
纯化实例
使用Protein A 1mL预装柱纯化鼠单抗IgG1，纯化效率高于95%。
图3 Protein A纯化结果示意图
FAQ
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常见问题 |
原因分析 |
推荐解决方案 |
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柱子反压过高 |
筛板堵塞 |
清洗或更换筛板 地 址： 上海市浦东新区天雄路166弄一号楼三层南单元 联系人： 李自转 电 话： 400-6111-883、021-34615995-8075 传 真： 021-34615995-188 Email：lizizhuan@yeasen.com
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