Cell Meter TUNEL凋亡检测试剂盒 红色荧光是美国AAT Bioquest研发的用于检测细胞凋亡的试剂盒，DN**段化代表晚期细胞凋亡的特征。该试剂盒可提供所有必需成分，并具有优化的测定方案。适用于荧光酶标仪，荧光显微镜或流式细胞仪。百萤生物是AAT Bioquest的中国代理商，为您提供优质的细胞凋亡检测试剂盒。

光谱：

光谱性质

消光系数：27500

Ex:                  549 

Em：             648

适用仪器

流式细胞仪

Ex:     488 nm

Em：   660/20 nm  

通道:   PE-Cy5 通道

荧光显微镜

Ex:    TRITC 滤波片组

Em:   TRITC 滤波片组

推荐孔板: 黑色透明底板

荧光酶标仪

Ex:    550 nm

Em：   590 - 650 nm

Cutoff： 570 nm

推荐孔板: 纯黑色孔板

实验方案

样品实验方案

简要概述

1. 用测试化合物准备细胞。

2. 与TUNEL工作溶液在37°C下孵育30分钟至1小时。

3. 洗涤细胞。

4. 用4％甲醛（可选）固定细胞。

5. 用带FITC滤光片的荧光显微镜或带FITC通道的流式细胞仪。读取Ex / Em = 490/525 nm（截止= 515 nm）处的荧光强度。

 溶液配制 

工作溶液配制

将0.5μL的100X Tunnelyte Green（组分A）添加到50μL的反应缓冲液（组分B）中，使总体积为50.5μL的TUNEL工作溶液。 避光。 注意：应单独评估每个细胞系，以确定细胞密度。 

实验步骤

1.根据您的特定协议，将细胞培养至密度以诱导凋亡。 对于在96孔板培养物中生长的贴壁细胞，我们建议大约30,000至50,000个细胞/孔，对于非贴壁细胞，建议大约1至2 x 106细胞/ mL。 同时，在每种标记条件下，用诱导群体相同的密度培养非诱导阴性对照细胞群体。 注意：我们用100 nM-1 µM星形孢菌素处理HeLa细胞4小时，以诱导细胞凋亡。

2.染色和固色：

2.1取出细胞培养基。
2.2向每个样品中添加50µL TUNEL工作溶液。
2.3在37°C下孵育30-60分钟。
2.4除去TUNEL工作溶液，并用200 µL /孔的PBS洗涤细胞1-2次。
2.5向每个样品中添加100uL反应缓冲液（组分B）。
2.6使用Ex / Em = 550/590-650 nm（Cut off= 570 nm）的荧光酶标仪，带TRITC滤光片的荧光显微镜或带FL3通道的流式细胞仪检测荧光强度。
2.7可选：从步骤5中移出反应缓冲液，并向每个孔中添加100 µL /孔/ 96孔板的4％甲醛固定缓冲液（未提供）。注意：对于非贴壁细胞，请添加所需量（例如2X106细胞/ mL）的4％甲醛固定液。
2.8在室温下将平板孵育20至30分钟。
2.9去除固定剂。
2.10用PBS洗涤细胞2-3次，并用100µL PBS /孔/ 96孔板替换。
2.11使用Ex / Em = 550/590-650nm（Cut off= 570 nm）的荧光酶标仪，带TRITC滤光片的荧光显微镜或带FL3通道的流式细胞仪检测荧光强度。
2.12可选：用1X Hoechst（组分C）在Ex / Em = 350/460 nm处染色细胞核，以进行图像分析

图1.与未处理的对照相比，用 100 nM 或 1 μM 星形孢菌素 (SS) 处理 4 小时后 HeLa 细胞中 TUNEL 反应的荧光图像。细胞与 TUNEL 工作溶液在 37ºC 下孵育 1 小时。使用具有 TRITC 滤光片组的荧光显微镜分析红色荧光信号。荧光标记的 DNA 链断裂在 SS 处理的细胞中显示出强烈的荧光染色。

图2. TUNEL 染色定义的 BM 中凋亡的 PCa 细胞。PCa细胞被泛细胞角蛋白识别为绿色，TUNEL信号以红色显示。比例尺，20 微米。资料来源：Axl 是 TGF-β2 诱导的骨髓中前列腺癌细胞休眠所必需的， Yumoto 等人，《科学报告》，2016 年 11 月。