作者：肖叶宁
肝细胞癌是一种较常见的恶性肿瘤类型，其发病率及死亡率较高，而且早期诊断困难，治疗后生存率仍不理想。CCNB2是细胞周期蛋白家族的重要成员之一，是细胞周期进程的正调控分子，能促进多种恶性肿瘤肿瘤发生发展，但在肝癌中生物学功能尚不清楚。本课题组前期研究发现CCNB2和肝癌的发生发展紧密相关，具备成为新型诊断生物标志物和临床治疗靶点的前景，其具体机制仍需进一步解析。2022年3月29日，中南大学湘雅医学院附属海口医院黄晓曦教授团队在《Aging-US》上发表题为“Cyclin B2 overexpression promotes tumour growth by regulating jagged 1 in hepatocellular carcinoma”的研究论文，该研究揭示了CCNB2或许经由对JAG1的靶向调节在肝癌发生发展中发挥作用，为进一步研究肝癌发病机理指出了新的思路。CCNB2可能与肝细胞癌的发生发展进程有关，有作为新的治疗靶点的潜力。本研究中用于敲低CCNB2的慢病毒产品及用于发现CCNB2下游基因的蛋白质组学、IPA分析均由吉凯基因提供产品或技术服务。
通过转染慢病毒构建CCNB2敲低的肝癌细胞模型，使用裸鼠荷瘤模型检验CCNB2对肝癌的影响。通过TMT蛋白质组学检测CCNB2下游靶基因，并通过差异蛋白分析、PRM靶向蛋白组学验证和IPA分析最终筛选出JAG1。基于此，进一步解析CCNB2通过调控JAG1促进肝癌进展的机制。
研究结果
1. 构建CCNB2低表达的肝癌细胞系
通过转染慢病毒构建CCNB2低表达的肝癌细胞模型，采用实时荧光定量 PCR评估CCNB2的敲低效率。CCNB2-RNAi慢病毒（由吉凯基因提供）感染后慢病毒感染后的KD组Huh-7细胞中CCNB2基因表达水平明显下调。
2. CCNB2促进裸鼠肿瘤生长
向随机分组的20只裸鼠分别皮下注射敲低CCNB2的肝癌细胞系Huh-7和未敲低的肝癌细胞系Huh-7，并观察裸鼠成瘤情况。裸鼠成瘤实验结果提示，敲低CCNB2降低裸鼠成瘤率、减小瘤体体积和重量、敲低CCNB2抑制瘤体增殖。总体结果提示，CCNB2可能具有促进肝癌增殖，影响肝癌产生和进展的作用。
3. 蛋白质组学寻找受CCNB2调控的下游基因
进一步，使用敲低CCNB2（KD组，n=3）和未敲低CCNB2（NC组，n=3）的肝癌细胞系Huh-7进行TMT蛋白质组学检测（由吉凯基因提供）以筛选受CCNB2调控的下游基因。蛋白质组学共检测到7271个蛋白，其中130个蛋白存在表达差异（fc>1.2，p＜0.05），包含78个上调蛋白和52个下调蛋白。我们从筛选出的差异蛋白质中挑选30个蛋白进行PRM靶向蛋白质组学验证及IPA分析（均由吉凯基因提供）。结果提示，一个蛋白JAG1在敲低组中下调，且IPA分析显示JAG1与肝细胞癌增殖和凋亡相关。因此，JAG1作为CCNB2的潜在下游靶点用于后续研究。
4.下调CCNB2可抑制JAG1的表达
我们检测了裸鼠瘤体中CCNB2与JAG1的表达相关性，结果表明敲低CCNB2可以使JAG1表达下调，CCNB2与JAG1的表达存在明显的功能相关性。
5. CCNB2通过调控JAG1促进肿瘤细胞增殖和迁移
我们继续在CCNB2敲低或对照的Huh-7细胞中过表达JAG1，并检测肝癌细胞增殖能力的改变。结果显示，敲低CCNB2 降低肝癌细胞系的增殖、迁移和侵袭能力，而过表达JAG1部分回复了CCNB2敲低引起的增殖、迁移和侵袭能力减弱的作用。这一结果印证了CCNB2与JAG1存在明显的功能相关性，JAG1可能作为CCNB2的下游靶点发挥促进肝细胞癌发生发展的作用。
6. JAG1在肝细胞癌组织中表达上调
本研究收集了82例肝癌石蜡包埋样本和相对应的20例癌旁石蜡包埋样本。免疫组化检测证实了JAG1在肝细胞癌组织中高表达，并且JAG1表达与肿瘤大小、肿瘤数目、癌栓形成显著有关。
我们的研究验证了敲低CCNB2在肝癌裸鼠成瘤中的作用，发现敲低CCNB2基因可抑制裸鼠成瘤。CCNB2可能具有促进肝癌增殖作用。通过蛋白质组学、PRM靶向蛋白组学验证和IPA分析筛选出CCNB2的下游靶标JAG1。细胞功能回复实验验证了CCNB2可能通过调控JAG1在HCC发生发展中发挥功能。总体，本研究发现了CCNB2的促癌作用，且揭示了一种新的CCNB2下游作用机制。CCNB2在未来可能有机会作为肝癌的候选生物标志物。
吉凯助力
本研究中用于敲低CCNB2的慢病毒产品及用于发现CCNB2下游基因的蛋白质组学、IPA分析均由吉凯基因提供产品或技术服务。
作者简介
中南大学湘雅医学院附属海口医院黄晓曦教授为本研究通讯作者，中南大学湘雅医学院附属海口医院硕士研究生肖叶宁为本研究第一作者。
中南大学湘雅医学院附属海口医院黄晓曦教授为本研究通讯作者，中南大学湘雅医学院附属海口医院硕士研究生肖叶宁为本研究第一作者。
左:黄晓曦教授 右:肖叶宁硕士
该研究揭示了CCNB2或许经由对JAG1的靶向调节在肝癌发生发展中发挥作用，为进一步研究肝癌发病机理指出了新的思路。CCNB2可能与肝细胞癌的发生发展进程有关，有作为新的治疗靶点的潜力。
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