“隔壁的实验室又发了3篇SCI文章，我们还在处理数据，这几家的试剂盒检测数据怎么都不一样？”小编每当听到这句话，每次感受都不同。对那些努力钻研数据的学者、那些把青春献给实验室的研究生们表示深深的同情。那么，造成试剂盒检测数据不一样的原因，除了一些实验操作、实验环境等客观因素外，还有试剂盒质量参数，如重复率、板内差、板间差、线性稀释、回收率等。但是，最重要的影响因素可能是作为检测标尺的标准品。所以，下面我们就揭晓影响不同ELISA试剂盒检测数据的差异和关于标准品的几个疑惑。
不同的ELISA试剂盒如何进行校准？
国际标准物进行校准
目前，ELISA试剂盒校准方法为应用NIBSC/WHO推荐的标准品对试剂盒进行校准。
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高质量的原料进行校准
ELISA试剂盒的检测指标种类可能远远多于NIBSC/WHO推荐的标准品，有时需要依靠高质量的ELISA试剂盒原料。目前，优质的进口原料（如重组蛋白作为标准品）依然是生产高质量ELISA试剂盒的前提条件之一，但是不同品牌的蛋白表达体系和质控标准不同，可能会导致原料的性能不同，进而造成检测数据的差异。
严谨的生物样本进行验证
随着国内生物技术的发展，自主研发蛋白表达、抗体制备、ELISA试剂盒开发技术也在不断进步。除了应用NIBSC/WHO推荐的标准品对试剂盒进行校准外，也可用一些暂无相关机构认可的生物样本进行验证，按照科学研究方法，对种属、性别、生命周期阶段、种类等因素划分所得到的生物样本进行验证。
生物样本验证ELISA试剂盒的试验数据
重组蛋白-ELISA试剂盒标准品的选择
目前，国内外的双抗夹心法ELISA试剂盒的标准品大多数属于重组蛋白，竞争法ELISA标准品更多样化，有可能为重组蛋白也可能为化学合成物质。为什么天然蛋白不用于作为标准品？双抗夹心法ELISA试剂盒选择重组蛋白为标准品的主要原因：
第一，天然蛋白均存在于复杂的生物样本中，大多数在细胞或组织中表达量可能较少，不能进行蛋白纯化或者成本高昂，无法获得大量的天然蛋白。
第二，ELISA试剂盒检测基于抗体和抗原的特异性结合，在研究之初，通过重组蛋白进行免疫特定动物获得特定的单克隆或者多克隆抗体，因此，抗体和免疫的抗原存在高亲和力和高特异性。
第三，随着蛋白表达技术的发展，重组蛋白和天然蛋白具有更高的相似度，特别是以酵母或细胞为代表的真核表达系统的发展，让真核表达的重组蛋白具有更多的空间构象和生物活性。
ELISA试剂盒的标准品如何使用？
如果ELISA试剂盒的标准品是重组蛋白，请提前20-30分钟从冰箱中取出试剂盒，平衡至室温(18-25℃)，如果试剂盒需分多次使用，请仅取出本次实验所需的酶标板条和试剂，剩余板条和试剂需按照要求条件保存。
标准品工作液的配制：将标准品的冻干粉末尽量集中到西林瓶或离心管底部，加入标准品/样品稀释液至冻干标准品中，室温水平静置10分钟，让重组蛋白恢复其空间构象，然后上下颠倒数次，待其充分溶解后，轻轻混匀，避免起泡，然后进行分装和使用即可。
标准品的保存和弃用：如果1个月内使用，ELISA试剂盒标准品可以暂存于4℃；如果1个月以上不用，标准品必须保存于-20℃以下环境；已配制好的标准品工作液如有剩余液体请切记要弃用，标准品工作液一定要现配现用。
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