基本信息
货号：22200（5mg）
储存条件：-20℃避光防潮
简介
JC-1广泛用于通过流式细胞术确定线粒体膜电位。它能够选择性地进入线粒体，并且随着线粒体膜电位的增加（超过约80-100mV的值）可逆地将其颜色从绿色变为橙色。这种性质是由于线粒体膜极化后JC-1聚集体的可逆形成导致发射光从530nm（即JC-1单体形式的发射）转变为590nm（即J-聚集形式的发射） 。当在490 nm处激发时，随着线粒体膜变得更多，JC-1的颜色从绿色到橙色可逆地变化偏振。使用通常安装在所有流式细胞仪中的过滤器可以检测两种颜色。可以在荧光通道1（FL1）和通道2（FL2）中的绿橙发射中分析绿色发射。使用JC-1的主要优点是它可以提供定性信息，考虑到从绿色到橙色荧光发射的转变，以及定量信息，考虑到纯荧光强度，可以在FL1和FL2通道中检测到。除了广泛用于流式细胞仪外，JC-1还用于荧光成像。我们已经开发出一种在荧光微孔板平台中使用它的方案。尽管JC-1在许多实验室中被广泛使用，但其水溶性差使得它在某些应用中难以使用。我们的JC-10具有比JC-1更好的水溶性，并且JC-10在一些细胞系中甚至具有优于JC-1的性能。
物理化学特性
分子量：652.23
储存方式：DMSO
Ex=515nm
Em=529nm和590nm
JC-1染色细胞分析
简要概括
使用测试化合物制备细胞®
添加JC-1工作溶液（96孔板100μL/孔或384孔板25μL/孔）®
室温或37 ℃孵育1小时®
移除JC-1工作 解决方案®
读取Ex / Em = 490/525 nm和490/590 nm处的荧光强度
注意：以下是我们推荐的活细胞方案。 该协议仅提供指南，应根据您的特定需求进行修改。
操作步骤
1.准备JC-1工作解决方案：
1.1在高质量无水DMSO中制备2至10 mM JC-1的储备液。 应及时使用原液; 任何剩余的溶液应等分并在<-20℃冷冻。
注意：避免反复冻融循环，避免光照。
1.2制备1X JC-1工作溶液：在实验当天，将JC-1固体溶解在DMSO中或将等份的JC-1储备溶液解冻至室温。 在Hanks和20 mM Hepes缓冲液（HHBS）或您选择的缓冲液（pH 7）和0.02％Pluronic®F-127中制备10至30μM1XJC-1工作溶液。 通过votexing很好地混合它们。
注意：JC-1不溶于水，因此它打算在溶液中聚集。 建议在将JC-1工作溶液加载到池中之前对其进行过滤。
2.用荧光酶标仪进行JC-1检测：
2.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间（例如，Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时）以诱导细胞凋亡。 对于空白孔（没有细胞的培养基），加入相应量的化合物缓冲液。
2.2将100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔板的JC-1工作溶液（来自步骤1.2）加入细胞板中。
2.3将JC-1加载板在37℃，5％CO2培养箱中孵育15-60分钟。
注意：适当的孵育时间取决于所使用的单个细胞类型和细胞浓度。优化每个实验的孵育时间。
2.4从平板上取下JC-1工作溶液，用HHBS或您选择的缓冲液清洗细胞。 将100μL/孔/ 96孔板或25μL/孔/ 384孔HHBS板加回到细胞板中。
2.5监测Ex / Em = 490/525 nm和490/590 nm处的荧光变化，进行比率分析。
3.用荧光显微镜或流式细胞仪进行JC-1测定：
3.1用测试化合物处理细胞一段所需的时间（例如，Jurkat细胞可以用喜树碱处理4-6小时）以诱导细胞凋亡。
3.2离心细胞，每管取1-5×105个细胞。
3.3将细胞重悬于500μLJC-1工作溶液中（来自步骤1.2）。
3.4在室温或37°C孵育10至30分钟，避光。
3.5用您选择的HHBS或缓冲液清洗细胞。 将细胞重悬于500μLHHBS中以获得每管1-5×10 5个细胞。
3.6使用荧光显微镜（使用FITC和TRITC滤光片）或流式细胞仪（使用FL1和FL2通道）监测Ex / Em = 490/525 nm和490/590 nm处的荧光变化。