产品内容：
提取液：液体50mL×1 瓶，4℃保存。
试剂一：液体30mL×1 瓶，4℃保存。
工作液：粉剂×2 瓶，4℃避光保存，临用前加15mL 试剂一溶解。
产品说明：
漆酶（CE1.10.3.2）是一种含铜的多酚氧化酶，属于铜蓝氧化酶家族，广泛分布于真菌和高
等植物中，具有较强的氧化还原能力，在纸浆生物漂白，环境污染物降解和木质纤维素降解
以及生物检测方面有非常广泛的应用。
漆酶分解产物ABTS 产生ABTS自由基，在420nm 处的吸光系数远大于底物ABTS，测定
ABTS 自由基的增长速率，可计算得漆酶的活性。
自备实验用品及仪器
天平、低温离心机、可见分光光度计、1 mL 玻璃比色皿、恒温水浴锅。
 
操作步骤：
一、 酶液提取
1、 细胞：按照细胞数量（104个）：提取液体积（ml）为500-1000:1 的比例（建议500万细胞加入1ml提取液），超声波破碎细菌或细胞（冰浴，功率30％或300W，超声3s，间隔7s，总时间3min），12000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
2、 组织：按照组织质量（g）：提取液体积（ml）为1:5-10 的比例（建议称取约0.1g组织，加入1ml提取液），进行冰浴匀浆；10000g 4℃离心10min，取上清，置冰上待测。
3、 培养液：直接待检。
二、 测定操作表
 
对照管
测定管
样本（mL）
 
0.1
煮沸样本（mL）
0.1
 
工作液（mL）
0.6
0.6
60℃，3min，测定420nm 处吸光值A，△A=A 测定管-A 对照管
三、 酶活性计算公式：
1． 按照蛋白浓度计算
酶活性定义：每毫克蛋白每分钟氧化1nmol 底物ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位（U）
漆酶活性（U/mg prot）=△A÷(ε×d) ×V 反总÷(V 样×Cpr)÷T= 65×△A÷Cpr
2． 按照样本质量计算
酶活性定义：每克样品每分钟氧化1nmol 底物ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位（U）
漆酶活性（U/g）=△A÷(ε×d) ×V 反总÷(V 样×W)÷T= 65×△A÷W
3． 按照细胞数量计算
酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol 底物ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位（U）
漆酶活性（U/104 cell）=△A÷(ε×d) ×V 反总÷(V 样×细胞数量÷V样总)÷T= 65×△A÷细胞数量
4． 按照液体体积计算
酶活性定义：每104个细胞每分钟氧化1nmol 底物ABTS 所需的酶量为一个酶活力单位（U）
漆酶活性（U/L）=△A÷(ε×d) ×V 反总÷V 样÷T= 65000×△A
ε：ABTS 毫摩尔消光系数；36L/mmol/cm；d：比色皿光径，1cm；V反总：反应总体积，0.7mL；V样：反应中样本体积，0.1mL；V 样总：加入提取液体积，1mL；Cpr：样本蛋白浓度，mg/mL；W，样本质量，g；T:反应时间，3min
注意事项：
1. 工作液需临用前配制，并且尽快使用，4℃保存一周，若变色则不能使用。
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